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軟瓊脂克隆化法具體操作過(guò)程 
      軟瓊脂克隆化法,細(xì)胞借助撒在軟瓊脂上單個(gè)細(xì)胞定位生長(zhǎng)，而達(dá)到克隆化，具體操作如下：
　　1．配2.5%的瓊脂糖30ml，水浴溶化后，移入45℃水浴中。
　　2．將117ml完全DMEM液和3ml10倍濃度的DMEM液混合，置45℃水浴預(yù)熱。
　　3．將瓊脂糖與DMEM液混合，即為含0.5%瓊脂糖的完全DMEM液，并加75×108脾細(xì)胞。
　　4．每塊平皿加10ml，于室溫中凝固。
　　5．DMEM中的細(xì)胞與DMEM—瓊脂1:1混合，將細(xì)胞瓊脂混合物2ml鋪于凝固的平板上，使其全部覆蓋。
　　6．放入CO2箱飽和濕度，37℃培養(yǎng)10天。
　　7．用PBS配制0.6%瓊脂糖，于沸水浴溶解后，置45℃，在保溫情況下取一試管，迅速加入0.1ml25%羊紅血球，0.2ml豚鼠補(bǔ)體，2.7ml0.6%瓊脂糖。
　　8．用3ml瓊脂糖—羊紅血球混合液覆蓋克隆。于37℃CO2箱孵育1h~2h。從克隆上部溶解羊紅血球的溶血范圍，可篩選抗羊紅血球Ig。