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單克隆抗體脾細(xì)胞選擇

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單克隆抗體脾細(xì)胞選擇
 　　材料
　　(1)**過的血清抗體滴度高的Balb/c鼠。
　　(2)1640培養(yǎng)液  單克隆抗體制備流程
      (3)2.5%FCS－1640營養(yǎng)液
　　操作方法
　　(1)拉頸或用CO2處死小白鼠。
　　(2)將小鼠放于70%酒精中浸泡**，取出固定于板上，在無菌條件下取脾。
　　(3)把脾放入5ml含有2.5%FCS的1640液中，冰浴下輕輕洗去脾上的紅血球。
　　(4)用鑷子輕輕擠壓脾，做成脾細(xì)胞懸液，用毛細(xì)管將懸液移入小試管中。
　　(5)直立小試管3min，使大塊的結(jié)締組織下沉，把細(xì)胞懸液移入離心管中。
　　(6)以2.5%FCS—1640充滿離心管，并以400g離心7min～10min（與此同時應(yīng)開始制備骨髓細(xì)胞）。
　　(7)把沉淀用約10ml的新鮮培養(yǎng)液再懸浮。
　　(8)重復(fù)⑹、⑺步驟。
　　(9)計算細(xì)胞，以臺盼蘭染色用相差顯微鏡檢查，活細(xì)胞數(shù)應(yīng)高于80%為合格。