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研究
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Cabozantinib是MET和VEGFR2的有效抑制劑，IC50值分別為1.3和0.035 nM。 Cabozantinib也抑制MET激活激酶結(jié)構(gòu)域突變Y1248H，D1246N或K1262R（分別為IC50 = 3.8,1.18和14.6nM）。卡博替尼顯示出對(duì)幾種激酶的強(qiáng)烈抑制作用，這些激酶也與腫瘤病理生理學(xué)有關(guān)，包括KIT，RET，AXL，TIE2和FLT3（分別為IC50 = 4.6,5.2,7,14.3和11.3nM）。在細(xì)胞試驗(yàn)中，Cabozantinib抑制MET和VEGFR2以及KIT，F(xiàn)LT3和AXL的磷酸化，IC50值分別為7.8,1.9,5.0,7.5和42μM。在許多人腫瘤細(xì)胞系中評(píng)估了Cabozantinib對(duì)增殖的作用。攜帶擴(kuò)增MET的SNU-5和Hs746T細(xì)胞對(duì)Cabozantinib*敏感（IC50分別為19和9.9 nM）;然而，缺乏MET擴(kuò)增的SNU-1和SNU-16細(xì)胞更具抗性（IC50分別為5,223和1,149nM）。 MDA-MB-231和U87MG細(xì)胞對(duì)Cabozantinib的敏感性水平相當(dāng)（IC50分別為6,421和1,851 nM），而H441，H69和PC3細(xì)胞系對(duì)Cabozantinib*不敏感，IC50值為21,700,20,200，分別為10,800 nM。此外，與野生型BaF3細(xì)胞（IC50 = 9,641 nM）相比，表達(dá)人FLT3-ITD（急性髓性白血病中的活化突變）的BaF3細(xì)胞對(duì)Cabozantinib敏感（IC50 = 15 nM）[2]。
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體內(nèi)研究
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Cabozantinib（XL184）后腫瘤血管分布減少，3 mg / kg時(shí)降低67％，30 mg / kg降低83％[1]。在小鼠模型中，Cabozantinib顯著改變腫瘤病理學(xué)，導(dǎo)致腫瘤和內(nèi)皮細(xì)胞增殖減少，同時(shí)增加細(xì)胞凋亡和乳腺癌，肺癌和膠質(zhì)瘤腫瘤模型中腫瘤生長(zhǎng)的劑量依賴性抑制。重要的是，用Cabozantinib**不會(huì)增加轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭械姆文[瘤負(fù)荷，已經(jīng)觀察到VEGF信號(hào)傳導(dǎo)抑制劑不靶向MET。基于體重劑量，Cabozantinib血漿暴露在大鼠中比在小鼠中高6至10倍，這導(dǎo)致在大鼠中誘導(dǎo)腫瘤生長(zhǎng)抑制/消退的較低劑量比在小鼠中小。卡博替尼的亞慢性給藥在小鼠和大鼠中具有良好的耐受性，沒(méi)有毒性跡象，這通過(guò)在**期間穩(wěn)定和/或增加體重來(lái)確定[2]。
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激酶實(shí)驗(yàn)
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使用熒光素酶偶聯(lián)的化學(xué)發(fā)光，33P-磷酰基轉(zhuǎn)移或AlphaScreen技術(shù)測(cè)定Cabozantinib對(duì)270種人激酶的廣泛組的抑制特性。使用重組人全長(zhǎng)，谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶標(biāo)簽或組氨酸標(biāo)簽融合蛋白，并且通過(guò)測(cè)量每種相應(yīng)激酶在Km或低于Km的ATP濃度下肽底物聚（Glu，Tyr）的磷酸化來(lái)確定IC 50值。通過(guò)測(cè)定ATP濃度范圍內(nèi)的IC50值，使用AlphaScreen Assay評(píng)估激酶抑制的機(jī)制[2]。
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細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
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在多種人腫瘤細(xì)胞系中評(píng)估了Cabozantinib對(duì)增殖的影響，包括含有擴(kuò)增的MET，SNU-1和SNU-16細(xì)胞的SNU-5和Hs746T細(xì)胞，MDA-MB-231和U87MG細(xì)胞，H441，H69，和PC3細(xì)胞系，以及BaF3細(xì)胞。將細(xì)胞在含有10％FBS的培養(yǎng)基中一式三份接種過(guò)夜。**天，用連續(xù)稀釋的Cabozantinib處理細(xì)胞48小時(shí)，然后使用Cell Proliferation ELISA，BrdUrd分析增殖[2]。
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動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
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小鼠[1] C57BL / 6背景中的RIP-Tag2小鼠用作腫瘤模型。除非另有說(shuō)明，否則RIP-Tag2小鼠在**開(kāi)始時(shí)為10周齡。將Cabozantinib以5mg / mL的濃度懸浮于無(wú)菌鹽水或水中，并通過(guò)管飼法每天施用7天。每天通過(guò)強(qiáng)飼法**7天的小鼠研究劑量依賴性效應(yīng)：XL880（1,10,20,40或60 mg / kg），Cabozantinib（3,10,30,40或60 mg / kg）或XL999 （25,40,50,60或75 mg / kg）。在用XL880（40mg / kg）處理6小時(shí)，1,4,7或14天的小鼠中研究作用的時(shí)間過(guò)程。在用XL880（40mg / kg）處理7天的小鼠中研究戒斷的影響，然后在0天，2天，7天或14天不進(jìn)行**。每組含有4-6只小鼠。小鼠[2]使用雌性nu / nu小鼠。將H441細(xì)胞（3×106）皮內(nèi)植入后腹部，當(dāng)腫瘤達(dá)到約150mg時(shí)，使用下式計(jì)算腫瘤重量:(腫瘤體積=長(zhǎng)度（mm）×寬度2（mm2）] / 2，小鼠隨機(jī)分組（每組n = 5）并口服單次100mg / kg劑量的Cabozantinib或載體。在指定的時(shí)間點(diǎn)收集腫瘤。合并的腫瘤裂解物用抗MET進(jìn)行**沉淀，并用抗磷酸酪氨酸MET進(jìn)行Western印跡。印跡剝離后，定量總MET作為上樣對(duì)照。大鼠[2]在雌性Wistar大鼠的第0天，將C6細(xì)胞（5×106）皮下接種到后腹部。當(dāng)腫瘤達(dá)到約250mg（3）植入后4天），將大鼠隨機(jī)分組（每組8只）并用卡博替尼或水載體口服，每日一次口服**12天。通過(guò)口服強(qiáng)飼法以2mL / kg給予卡博替尼。每日收集體重，并測(cè)量腫瘤重量每周收集兩次。百分比腫瘤生長(zhǎng)抑制/回歸值表示如下：1 - [（第0天的平均**腫瘤重量 - 第0天的平均腫瘤重量）/（*后**的平均載體腫瘤重量 - 第0天的平均腫瘤重量）] ×100。通過(guò)單向ANOVA進(jìn)行Cabozantinib**的腫瘤與媒介物**的腫瘤相對(duì)于給藥前腫瘤的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，其顯著性定義為P <0.05。在*終劑量后4小時(shí)收集血液，并制備血漿以確定卡博替尼的濃度。
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參考文獻(xiàn)
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[1]. You WK, et al. VEGF and c-Met blockade amplify angiogenesis inhibition in pancreatic islet cancer. Cancer Res, 2011, 71(14), 4758-4768.
[2]. Yakes FM, et al. Cabozantinib (XL184), a novel MET and VEGFR2 inhibitor, simultaneously suppresses metastasis, angiogenesis, and tumor growth. Mol Cancer Ther, 2011, 10(12), 2298-2308.
[3]. Fuse MA, et al. Combination Therapy With c-Met and Src Inhibitors Induces Caspase-Dependent Apoptosis of Merlin-Deficient Schwann Cells and Suppresses Growth of Schwannoma Cells. Mol Cancer Ther. Mol Cancer Ther. 2017 Nov;16(11):2387-2398.
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