常用名

AZ505

英文名

AZ505

CAS號(hào)

1035227-43-0

分子量

577.54200

密度

無(wú)資料

沸點(diǎn)

無(wú)資料

分子式

C29H38Cl2N4O4

熔點(diǎn)

無(wú)資料

閃點(diǎn)

無(wú)資料

體外研究

AZ505具有高選擇性，在體外亞微摩爾濃度下具有活性。 AZ505對(duì)SMYD2的IC50為0.12μM，比其他組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶（如SMYD3（IC50>83.3μM），DOT1L（IC50>83.3μM）和EZH2（IC50> 83.3）的AZ505的IC50大> 600倍。 μM）[1]。 AZ505是一種有效的選擇性SMYD2抑制劑，IC50為0.12μM。人SMYD（SET和MYND結(jié)構(gòu)域蛋白）蛋白質(zhì)賴(lài)氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶家族包含五個(gè)成員（SMYD1-5）。此外，AZ505不能抑制一組蛋白質(zhì)賴(lài)氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶的酶活性。 AZ505被提名用于ITC結(jié)合研究，Kd為0.5μM。相反，p53底物肽的計(jì)算Kd為3.7μM。 AZ505與SMYD2的結(jié)合主要由熵驅(qū)動(dòng)，這通常表明結(jié)合是通過(guò)疏水相互作用介導(dǎo)的，只有很少的特定氫鍵[2]。

激酶實(shí)驗(yàn)

SMYD2在昆蟲(chóng)細(xì)胞中表達(dá)并純化。 AlphaScreen技術(shù)用于篩選我們的化學(xué)文庫(kù)，用于SMYD2的小分子抑制劑。在室溫下使用1.25nM SMYD2蛋白，200nM SAM和100nM生物素化在TDT緩沖液（50mM Tris-HCl [pH9.0]，2mM DTT和0.01％吐溫20）中進(jìn)行甲基化（12μL）反應(yīng)。 p53肽底物（生物素 - 氨基己酰基-GSRAHSSHLKSKKGQSTSRH）在低體積384孔板中。孵育75分鐘后，加入5μL檢測(cè)溶液（20 mM HEPES [pH 7.4]，1.7 mg / mL BSA，340 mM NaCl，680μMSAH，0.04 mg / mL鏈霉抗生物素蛋白包被的AlphaScreen）淬滅反應(yīng)供體和蛋白A包被的受體珠）和1nM的定制p53K370me1多克隆抗體。將反應(yīng)板在室溫下在黑暗中溫育過(guò)夜，并使用Envision 2101多標(biāo)簽讀數(shù)器讀取。對(duì)于SMYD2顯示> 50％抑制的化合物被指定用于濃度劑量 - 響應(yīng)測(cè)定，并且還進(jìn)行人工測(cè)定。從30μM開(kāi)始選擇七種化合物濃度，具有六個(gè)半對(duì)數(shù)稀釋步驟。人工測(cè)定條件與SMYD2酶活性測(cè)定中的相同，除了不存在SMYD2蛋白和存在1nM甲基化的p53肽。使用內(nèi)部軟件從劑量 - 反應(yīng)數(shù)據(jù)計(jì)算IC 50值[2]。