植物次生物質(zhì)是植物體內(nèi)經(jīng)過復(fù)雜的分支代謝途徑的產(chǎn)物,一般沒有營養(yǎng)價值,但構(gòu)成不同植物特有的味道,進(jìn)而在植物防御中起到關(guān)鍵作用。植食性昆蟲對植物的喜好程度取決于次生物質(zhì)的種類和含量。農(nóng)業(yè)害蟲棉鈴蟲(Helicoverpa armigera)雖然危害很多農(nóng)作物,但對不同作物的喜好程度、危害程度均不同,其中“苦味”的次生物質(zhì)的存在是決定幼蟲是否偏好取食的關(guān)鍵因素。
10月8日,中國科學(xué)院動物研究所王琛柱研究團(tuán)隊(duì)在PLoS Genetics上,發(fā)表了題為Functional analysis of a bitter gustatory receptor highly expressed in the larval maxillary galea of Helicoverpa armigera的研究論文。該研究揭示了棉鈴蟲味覺受體HarmGr180是苦味物質(zhì)香豆素(coumarin)的受體,并參與幼蟲對黑芥子苷(sinigrin)和馬錢子堿(strychnine)的感受。該論文的共同**作者陳燕和王沛超是中國科學(xué)院動物研究所、中國科學(xué)院大學(xué)博士研究生,指導(dǎo)老師是王琛柱研究員。陳燕的博士論文課題主要研究棉鈴蟲苦味受體的功能,王沛超的博士課題則主攻基因編輯技術(shù)在昆蟲味覺方面的利用。該實(shí)驗(yàn)室的博士生張帥帥和李國成、博士后楊軍、**工程師黃玲巧等參與了本項(xiàng)研究。
該團(tuán)隊(duì)前期的轉(zhuǎn)錄組分析發(fā)現(xiàn),在棉鈴蟲幼蟲的口器上表達(dá)多種味覺受體(gustatory receptor,Gr),其中HarmGr180的表達(dá)量*高,故該團(tuán)隊(duì)將注意力放在這個受體上。當(dāng)把該受體基因在爪蟾卵母細(xì)胞表達(dá)后,研究通過雙電極電壓鉗記錄發(fā)現(xiàn),表達(dá)HarmGr180的細(xì)胞特異地對香豆素有電生理反應(yīng)(圖1)。研究核實(shí)了幼蟲口器上的味覺感器是否有對香豆素反應(yīng)的感器。研究利用頂端記錄發(fā)現(xiàn),在幼蟲口器的下顎外顎葉上,一對中栓錐感器對香豆素有電生理反應(yīng),且香豆素可抑制另一對側(cè)栓椎感器對蔗糖的反應(yīng)。
為了剖析HarmGr180的在體功能,科研團(tuán)隊(duì)利用CRISPR/Cas9系統(tǒng)構(gòu)建并獲得了棉鈴蟲的HarmGr180純合突變體(HarmGr180-/-)。研究顯示,該突變體幼蟲中栓錐感器失去了對香豆素的反應(yīng),同時降低了對黑芥子苷和馬錢子堿的反應(yīng),但不影響香豆素對側(cè)栓椎感器的抑制作用。進(jìn)一步的行為學(xué)實(shí)驗(yàn)表明,盡管香豆素、黑芥子苷和馬錢子堿對突變體幼蟲仍有一定的取食遏制作用,但取食遏制指數(shù)顯著降低。
科研人員從分子生物學(xué)、組學(xué)、電生理學(xué)、行為等角度揭示了棉鈴蟲苦味受體HarmGr180的功能,這對增進(jìn)對植食性昆蟲味覺感受分子基礎(chǔ)的認(rèn)知、研發(fā)害蟲拒食劑具有重要意義。棉鈴蟲苦味受體估計(jì)有180個,其中大多數(shù)的功能尚未知。該研究為后續(xù)研究工作奠定了基礎(chǔ),并為其他植食性昆蟲味覺研究提供了新視角。