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**組織化學(xué)抗體的稀釋度、滴加與操存
《一》實(shí)驗(yàn)計(jì)劃
   每次實(shí)驗(yàn)前應(yīng)列出詳細(xì)實(shí)驗(yàn)計(jì)劃，其中包括實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹M用方法、所用一抗和二抗的種類和效價(jià)、預(yù)實(shí)施的操作流程方案以及預(yù)期實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。實(shí)驗(yàn)分組編號(hào)用玻璃筆標(biāo)記在玻片上，對(duì)每一抗體均應(yīng)配以陽(yáng)性和陰性對(duì)照。
《二》抗體的稀釋度
   抗體稀釋度，即抗體濃度。組織中抗原的**染色是通過(guò)適宜的抗體溶液系統(tǒng)而得以定性和定位，因而抗原與抗體濃度的比例十分重要。*佳的抗體稀釋度可提高染色質(zhì)量，與周圍組織或細(xì)胞形成良好的染色對(duì)比。如果抗體濃度過(guò)高，反而減少抗體與抗原的結(jié)合，甚至導(dǎo)致假陰性結(jié)果，故各實(shí)驗(yàn)室每當(dāng)使用一種新抗體時(shí)，必須試用多種稀釋度，從中確定*佳工作濃度，以防假陰性結(jié)果的出現(xiàn)。由于標(biāo)本的固定、切片種類、稀釋液種類和濕盒等具體條件均可影響稀釋度，故在測(cè)試之前必須使這些條件穩(wěn)定。稀釋度應(yīng)選擇陽(yáng)性反應(yīng)著色*強(qiáng)、背景著色*弱的滴度。
不同濃度BMP4對(duì)ChAT陽(yáng)性**反應(yīng)細(xì)胞數(shù)量的影響
 
   目前，許多實(shí)驗(yàn)室常用濃縮型一抗，使用前稀釋成工作濃度的稀釋方法見。由于市售的常用二抗，即生物素化IgG，一般由試劑公司配成即用型，并裝入**組織化學(xué)試劑盒內(nèi)，故不必測(cè)試二抗工作濃度。
  確定一抗*佳工作濃度方法
從中可以看出，在一抗稀釋度1：100和1：200之間可找出*佳稀釋度。
《三)滴加抗體注意事項(xiàng)
   切片在血清封閉后，傾去多余血清，便可滴加**抗體。滴加前取出玻片，用吸水紙拭去組織周圍的液體，組織與細(xì)胞表面的液體要用濾紙條輕輕吸掉，但注意勿使組織干燥，盡快滴加抗體工作液1滴(約50ul)于組織表面。由于切片周圍無(wú)液體，滴加的抗體成為一個(gè)液滴，這樣既可節(jié)省抗體，又可增加抗原與抗體結(jié)合的機(jī)會(huì)。如果玻片上是培養(yǎng)細(xì)胞，應(yīng)在鏡下選擇一個(gè)理想的區(qū)域用**組織化學(xué)油筆在此區(qū)域外圍畫一圓圈，再滴加抗體，爾后應(yīng)輕輕搖動(dòng)切片數(shù)秒，以促進(jìn)抗體與組織待測(cè)抗原的結(jié)合，避免假陰性小區(qū)的出現(xiàn)。這一操作過(guò)程雖然簡(jiǎn)單，卻十分重要。加抗體時(shí)切忌加樣器或吸頭碰到組織或細(xì)胞，以免造成破損。
《四》抗體的操存
   1．抗體分裝購(gòu)人的濃縮型抗體，為避免反復(fù)凍融而失效，一般需要分裝在多個(gè)安瓿中，根據(jù)需要量，每安瓿含10一20rA。除留一支現(xiàn)用，其余應(yīng)立即放置低溫冰箱內(nèi)貯存(-20℃以下)。用時(shí)取一支。以免長(zhǎng)期保存在4℃冰箱內(nèi)失效。
   2．抗體稀釋一般按其工作濃度稀釋，如1：100、1：1000等，然后用旋渦器混勻液體。剩余的抗體可保存在斗℃冰箱內(nèi)．盡量在1—2個(gè)月內(nèi)用完，而不要放在0℃以下。否則抗體會(huì)很快結(jié)冰，反復(fù)凍融可使抗體效價(jià)急劇下降。對(duì)于抗體的稀釋液，在夏天溫度很高時(shí)，*好加入少許防腐劑如疊氮鈉或柳硫汞等，以免在切片上作用時(shí)間超過(guò)10小時(shí)而生**。
   3．無(wú)菌與**保持使用中的抗體無(wú)菌是困難的，但是與抗體接觸的工具如滴管、吸管、試管、安瓿以及加樣器等*好經(jīng)過(guò)**，盡量減少污染的機(jī)會(huì)．否則抗體極易污染**與**，從而迅速發(fā)生渾濁沉淀而失效。